PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.

• DNA damage Morus nigra follicle growth in vitro culture ovarian cortex leaf extraction Oocyte medicinal plant apoptosis ovarian tissue culture sheep

Abstract in Portuguese:

Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.

• DNA folículo primordial cultivo in vitro córtex ovariano ovelha extrato de folha Morus nigra crescimento folicular Oócito planta medicinal apoptose cultivo de tecido ovariano ovinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Bahr Arias M.V., Padilha F.N. & Perugini M.R.E. 2017. Deep tissue culture and hemoculture in dogs with wounds and sepsis. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1483-1490. Departamento de Clínicas Veterinárias, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid Km 380, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: vicky@uel.br Contaminated and infected wounds occur very frequently in veterinary medicine and can cause systemic inflammatory response syndrome, sepsis, and death. This study aimed to test the feasibility of collecting wound material by deep-tissue or punch biopsy for microbial culture, determine the frequency of bacteria in the wound(s) and blood cultures and the susceptibility of these microbes to antimicrobials, and evaluate clinical parameters that could be related to prognosis. Thirty dogs with wounds and signs of SIRS/sepsis were included in this study. Bacteria were isolated from all wounds and 41 bacterial isolates could be identified based on culture of the materials collected by punch biopsy; 53.66% of the isolates were gram-negative, mainly involving Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, and Enterococcus spp., and 46.34% were gram-positive bacteria such as Streptococcus spp., Enterococcus spp., and Staphylococcus spp. The survival rate was 66.67%. Based on blood culture analysis, we identified bacteremia in seven patients, predominantly of gram-negative bacteria, which negatively affected patient survival, as six dogs died. Hypoglycemia (≤60mg/dL) and severe hyperglycemia (≥180mg/dL) also negatively affected survival as 23.33% of the hypo/hyperglycemic dogs died. Factors such as blood lactate level at admission and hematocrit levels, and mean arterial pressure were not significantly correlated with death or survival of the dogs.

• Tissue culture hemoculture sepsis bacteremia cultura de tecido hemocultura sepse bacteriemi

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Bahr Arias M.V., Padilha F.N. & Perugini M.R.E. 2017. Deep tissue culture and hemoculture in dogs with wounds and sepsis. [Cultura de tecido profundo e hemocultura em cães com feridas e sepse. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1483-1490. Departamento de Clínicas Veterinárias, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid Km 380, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: vicky@uel.br As feridas contaminadas e infectadas em cães ocorrem com grande frequência na medicina veterinária e podem causar síndrome da resposta inflamatória sistêmica, sepse e morte. Os objetivos do presente trabalho foram verificar a viabilidade da técnica de coleta de material da ferida por biópsia para realização de cultura microbiana, determinar a frequência das bactérias nas culturas das feridas e hemoculturas e a susceptibilidade destes agentes aos antimicrobianos, bem como avaliar parâmetros clínicos que pudessem ser relacionados ao prognóstico em 30 cães com feridas e sinais de SIRS/sepse. Foram isoladas bactérias de todas as feridas e a técnica de coleta de material para cultura por biópsia permitiu a obtenção de 41 agentes microbianos, sendo isoladas 53,66% bactérias Gram negativas e 46,34% Gram positivas, principalmente Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Enterococcus spp. As bactérias gram positivas isoladas foram Streptococcus spp., Enterococcus spp. e Staphylococcus spp. A taxa de sobrevivência foi 66,67%. Na hemocultura constatou-se bacteremia em sete pacientes, com predominância de bactérias Gram negativas, o que influenciou negativamente na sobrevivência dos pacientes, pois seis cães vieram a óbito. A hipoglicemia (≤60mg/dL) ou hiperglicemia severa (≥180mg/dL), também influenciaram negativamente a sobrevivência, pois 23,33% dos pacientes hipo/hiperglicêmicos vieram a óbito. Já fatores como nível sérico de lactato na admissão do paciente, pressão arterial média (PAM) e hematócrito não apresentaram correlação estatística com o óbito ou sobrevivência destes pacientes.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Schmidt C., Cargnelutti J.F., Martins M., Weiblen R. & Flores E.F. 2012. [Experimental vaccine produced in tissue culture confers partial protection against contagious ecthyma in sheep.] Vacina experimental produzida em cultivo celular confere proteção parcial contra o ectima contagioso em ovinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(1):11-16. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com Contagious ecthyma, also known as orf, is a debilitating disease of sheep and goats caused by the parapoxvirus, orf virus (ORFV). Vaccination has been used with relative success to reduce the losses caused by the disease, yet the current vaccines contain virulent virus, are empirically produced through skin scarification of live lambs, and present questionable efficacy. Therefore, the present study aimed at developing and testing an experimental ORFV vaccine produced in tissue culture. The ORFV strain IA-82 was submitted to 21 passages in BHK-21 cells and then used to immunize lambs (n=30) through skin scarification of the internal face of the hind limb. Vaccination produced localized pustules and scabs lesions in 16 out of 30 animals, indicating an adequate replication of the vaccine virus. Ninety days after vaccination, vaccinated (n=16) and control lambs (n=16) were inoculated with a virulent ORFV strain (106,9TCID50/ml) in the labial commissure. Vaccinated and control lambs developed typical orf lesions, characterized by hyperemia, vesicles, pustules and scab formation. Nonetheless, vaccinated animals developed milder lesions compared to controls and the clinical scores were significantly lower (p<0.05) between days 10 and 22 post-challenge. In addition, the mean duration of clinical disease was significantly reduced in vaccinated animals (p<0.05). Furthermore, vaccinated animals excreted much less virus (p<0.05) and for a significantly shorter period of time than did the controls (13 days versus 22 days, p<0.001). These results demonstrate partial protection by the experimental vaccine and, upon improvement of immunization and protection indices, are promising towards the use of tissue culture-based ORFV vaccines.

• Contagious ecthyma orf ectima contagioso

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Schmidt C., Cargnelutti J.F., Martins M., Weiblen R. & Flores E.F. 2012. [Experimental vaccine produced in tissue culture confers partial protection against contagious ecthyma in sheep.] Vacina experimental produzida em cultivo celular confere proteção parcial contra o ectima contagioso em ovinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(1):11-16. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com O ectima contagioso (também conhecido como orf), é uma doença debilitante de ovinos e caprinos causada pelo vírus do orf (ORFV). A vacinação tem sido usada com relativo sucesso no controle da doença. No entanto, as vacinas atuais contêm amostras virulentas do agente, são produzidas por escarificação cutânea de animais, e apresentam eficácia questionável. Assim, o presente trabalho teve como objetivo produzir e testar a eficácia de uma vacina experimental produzida em cultivo celular. A cepa IA-82 do ORFV foi submetida a 21 passagens em cultivo de células BHK-21 e usada para vacinar ovinos jovens (n=30), por escarificação cutânea na face interna da coxa. A vacinação produziu pústulas e crostas em 16 dos 30 ovinos vacinados, indicando imunização adequada. Noventa dias após a vacinação, ovinos vacinados (n=16) e controles (n=16) foram inoculados com uma cepa virulenta do ORFV (106,9DICC50/mL) após escarificação na comissura labial. Todos os animais desenvolveram lesões típicas de ectima, incluindo hiperemia, vesículas, pústulas e crostas. No entanto, os animais vacinados desenvolveram lesões mais leves e passageiras do que os controles, e os escores clínicos foram estatisticamente diferentes (p<0,05) entre os dias 10 e 22 pós-desafio. Além disso, o tempo de duração da doença foi significativamente inferior (p<0,05) nos animais vacinados. Os animais vacinados também excretaram menor quantidade de vírus (p<0,05) e por um período significativamente mais curto do que os controles (13 dias versus 22 dias, p<0,001). Esses resultados demonstram a proteção parcial conferida pela vacina experimental e, dependendo da melhoria dos índices de imunização e proteção, são promissores no sentido da utilização de vacinas contra o ORFV produzidas em cultivo celular.